Tsunade es la nieta del primer Hokage y Mito Uzumaki, y la sobrina nieta del Segundo Hokage, lo que otros personajes para llamar a su "princesa" (姫, Hime). Ella es, junto con Jiraiya y Orochimaru, antigua alumna del Tercer Hokage Hiruzen Sarutobi y son considerados los tres legendarios Sannin. Tsunade es muy conocida por sus pechos extremadamente grandes (106 centímetros, según la estimación de Jiraiya), a pesar de que Jiraiya se refiere a ella como "Tsunade pecho plano" durante su infanciaDurante la Segunda Gran Guerra Shinobi, Tsunade y sus ex compañeros lucharon contra Hanzō, que les dio el título de "Tres legendarios Shinobi de Konoha " (伝説 の 三 忍, Densetsu no Sannin) como recompensa por sobrevivir a la contienda de la batalla. En su camino de vuelta a Konoha, se encontraron con los Huérfanos de la Lluvia, que Jiraiya optó por entrenar. A lo largo de la guerra, ella se hizo famosa por sus frecuentes intentos de contrarrestar las intoxicaciones de Chiyo, la cual desarrollo unos venenos para las marionetas, ganando el desprecio de Chiyo por ello. Además, según Jiraiya, Tsunade fue la razón por la que Konoha ganó la guerra.
En algún punto de la historia, entre la segunda y la tercera guerras Shinobi, Tsunade le dio a su hermano, Nawaki, un collar de cristal como regalo de cumpleaños, para que le ayudara a cumplir su sueño de convertirse en Hokage; este collar le pertenecía a su abuelo, Hashirama Senju, y tenía un poder especial en su interior. Tiempo después, Nawaki muere en la guerra y el collar que llevaba en el cuello volvió a posesión de Tsunade.
Más tarde, Tsunade se enamoró de un hombre llamado Dan, que al igual que Nawaki quería convertirse en Hokage y Tsunade como muestra de afecto le regala el collar de su abuelo a Dan, quien también cae en batalla al poco tiempo de usar el collar; como consecuencia de esta muerte, Tsunade padece hemofobia (miedo a la sangre), que la hacía no apta para participar en más batallas.
Tsunade llegó a pensar que el collar estaba maldito, y que no podría darle a otra persona, pues aquel a quien regalara el collar, moriría al poco tiempo; además perdió la fe en las enseñanzas de su maestro, el Tercer Hokage y abandonó Konoha con la sobrina de Dan, Shizune, convirtiéndose en su aprendiz.
Tsunade normalmente proyecta una actitud dura, incluso cuando se enfrentan a grandes dificultades personales, y rara vez hace cumplidos o alabanzas a las personas. Ella fácilmente critica a otros por sus faltas, como Naruto por su inmadurez, o por su perversión a Jiraiya, aunque sus hábitos son rara vez mejores. En ocasiones, sin embargo, Tsunade muestra simpatía por los demás, consolando a Shikamaru que, si bien no logró su misión de traer a Sasuke de vuelta a Konoha, todos sus compañeros sobrevivieron. Esto se manifiesta también cuando trabajaba duro para sanar Rock Lee, para que pudiera seguir siendo un ninja. También se dejó llorar cuando se enteró de la muerte de Jiraiya, aunque no en público.Cuando se introdujo por primera vez, Tsunade era cínica de cualquier persona con sueños, sobre todo aquellos que quieren convertirse en Hokage. Después, con la ayuda de Naruto se da cuenta de que este cinismo es un insulto a la memoria de Dan y Nawaki. Ella tiene un cambio de corazón, pone su fe en Naruto, y asume el manto de la Hokage misma, llevando a cabo los sueños de Dan y Nawaki. Como Hokage, Tsunade ha demostrado el mismo nivel de lealtad al pueblo que Hokage anterior, celebrada, durante la invasión de Pain, lanzó todo su chakra para salvar la vida de cientos de personas dentro de Konoha, con gran riesgo personal. Tsunade también tiene una gran fe en la próxima generación, y ve la posibilidad de que Naruto y el resto de Konoha espera.
Tsunade también es un jugadora compulsiva, con la desventaja de tener mala suerte. Como resultado, ella ha sido elevada a un estatus cómico como "la legendaria perdedora" (伝説 の カモ, Densetsu no Kamo) a causa de los otros beneficios brutos que han hecho fuera de su desgracia y la adicción al juego. En los raros casos que Tsunade golpea una racha ganadora, ella cree que es un mal presagio, y cosas malas tienden a suceder a ella o a sus compañeros después. El símbolo en la parte posterior de su abrigo, 赌 (kake), significa "juego", o "apuesta", puesto que el juego es uno de sus pasatiempos favoritos.
En situaciones que amenazan la vida o importantes que involucran a alguien a quien le importa en peligro, ella tiende a la ira contra las personas que están en desacuerdo con su plan, como las restricciones de los Sabios de Konoha puestas en Naruto, o el argumento de si Naruto y Killer Bee deben participar en la Cuarta Gran Guerra Ninja, incluso llamando a Gaara un punk "pequeño" de una vez por desacuerdo.
Tsunade rechaza todos los avances románticos de Jiraiya en la mayor parte de la trama. Mientras que él está en la investigación de Pain en Amegakure, apuesta que va a morir para que su mala suerte se asegurara de que sobreviva. Cuando ella descubre que ha muerto, piensa de nuevo en sus tiempos juntos, y llora por la pérdida de su buen amigo. Es así como se convierte en la última sobreviviente de los Legendarios Sannin.
Tsunade tomó a Shizune, la sobrina de su novio, como aprendiz, y confía mucho en ella. De hecho, Shizune es una de las pocas personas en las que Tsunade confía con absoluta certeza. Tsunade también es propietaria de un cerdo, Tonton, como mascota, y la deja al cuidado de Shizune.
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